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- La deregolazione dell’RNA circolare (circRNA) facilita la neoplasia del carcinoma papillare della tiroide (PTC). Lo scopo di questo studio era di determinare la funzione e il meccanismo di circ_0000644 nella regolazione dello sviluppo del PTC. Espressioni di Circ_0000644, microRNA-1205 (miR-1205) ed E2F del fattore di trascrizione 3 (E2F3) sono state rilevate mediante reazione a catena della polimerasi quantitativa in tempo reale (qRT-PCR). Sono stati utilizzati saggi con actinomicina D (ActD) e ribonucleasi R ( RNasi R) per verificare le caratteristiche circolari di circ_0000644. Dopo la soppressione di circ_0000644 , la crescita, la migrazione, l’invasione e l’apoptosi delle cellule PTC sono state valutate utilizzando rispettivamente il kit di conteggio delle cellule -8 (CCK-8), il saggio Transwell e l’analisi citometrica a flusso.
- La relazione regolatoria tra circ_0000644, E2F3 e miR-1205 è stata confermata nel saggio di immunoprecipitazione dell’RNA (RIP) e nel saggio reporter della doppia luciferasi. Inoltre, gli effetti regolatori di circ_0000644 sul livello della proteina E2F3 sono stati analizzati mediante Western blotting. In PTC, circ_0000644 ha mostrato un’elevata espressione ed era localizzato principalmente nel citoplasma e aveva una struttura stabile. L’impatto circ_0000644 ha inibito la crescita, la migrazione e l’invasione del PTC e ha facilitato l’apoptosi. Circ_0000644 potrebbe interagire direttamente con miR-1205 per inibire l’espressione di miR-1205 e fungere da spugna miR-1205 per modulare l’espressione di E2F3 nelle cellule PTC. Circ_0000644 aumenta l’espressione di E2F3 spugnando miR-1205 per promuovere la progressione del PTC.
Carbonilazione proteica: evitamento delle trappole nel dosaggio della 2,4-dinitrofenilidrazina.
Il contenuto di carbonile proteico è ampiamente utilizzato sia come indicatore dello stress ossidativo che come misura del danno ossidativo. I metodi ampiamente utilizzati di test di carbonilazione proteica utilizzano la reazione di gruppi carbonilici con 2,4-dinitrofenilidrazina (DNPH) per produrre 2,4-dinitrofenilidrazone legato alle proteine. Gli idrazoni possono essere quantificati spettrofotometricamente o, per una maggiore sensibilità, rilevati immunochimicamente utilizzando anticorpi anti-dinitrofenile. È importante prestare attenzione alla metodologia per evitare l’elevazione degli artefatti delle misurazioni del carbonile proteico. Abbiamo testato gli estratti di Escherichia coliidentificare ed eliminare tali effetti. La contaminazione con acido nucleico ha causato un aumento grave e artefatto del contenuto di carbonili proteici determinato mediante tecniche spettrofotometriche.
Sia gli oligonucleotidi di DNA sintetizzati in vitro che il DNA cromosomico purificato hanno reagito fortemente con 2,4-DNPH. Il trattamento di estratti cellulari con DNasi + RNasi o streptomicina solfato per precipitare gli acidi nucleici ha ridotto drasticamente il carbonile visibile, mentre l’esposizione alla proteinasi K no.
Il kit commerciale per il rilevamento immunochimico della carbonilazione proteica (OxyBlot di Chemicon / Millipore) raccomanda un’elevata concentrazione di tiolo nel tampone di omogeneizzazione. Abbiamo scoperto che questa raccomandazione porta a un raddoppio artificiale della proteina carbonile, probabilmente a causa di una reazione di Fenton stimolata dal tiolo. Evitare le condizioni ossidative, rimuovere gli acidi nucleici e etichettare rapidamente i campioni può prevenire effetti di artefatto sulle misurazioni del carbonile proteico.
L’esposizione perinatale a Pb2 + modifica l’espressione dei geni associati allo spostamento neuroevolutivo del GABA nei ratti postnatali
Il piombo (Pb2 +) è un agente neurotossico ambientale che interferisce con lo sviluppo neurologico, la comunicazione e l’organizzazione competendo con la segnalazione di Ca2 +. Non è chiaro come l’esposizione perinatale a Pb2 + influenzi la regolazione genica correlata a Ca2 +. Tuttavia, Ca2 + attiva la subunità β-3 del canale del calcio voltaggio-sensibile di tipo L (Ca-β3), che autoregola l’eccitabilità neuronale e svolge un ruolo nello spostamento del GABA dalla neurotrasmissione eccitatoria a quella inibitoria .
Un totale di otto femmine (n = 4 controlli e n = 4 perinatali) e quattro maschi (n = 2 controlli e n = 2 perinatali) sono stati utilizzati come riproduttori per fungere da madri e padri.
- Le cucciolate della madre di ogni cucciolata variavano da N = 6-10 cuccioli per cucciolata (M = 8, SD = 2), indipendentemente dal trattamento Pb2 +, maschio rispetto alla femmina. Poiché c’erano più maschi che femmine in ogni cucciolata, al fine di valutare e controllare equamente gli effetti di Pb2 + – e la cucciolata in tutti i momenti di sviluppo testati, le femmine sono state escluse a causa dell’insufficiente disponibilità di dimensioni del campione dalla cucciolata ottenuta. .
- Dalle cucciolate incluse, in questo studio sono stati utilizzati 24 ratti maschi con cappuccio Long Evans sperimentalmente ingenui (controllo N = 12; Pb2 + N = 12). I cervelli sono stati estratti dalla corteccia prefrontale di ratto (PFC) e dall’ippocampo (HP) il giorno postpartum (PND) 2, 7, 14 e 22, omogeneizzati in 1 ml di reagente TRIzol per 100 mg di tessuto utilizzando un omogeneizzatore di vetro Teflon.
- Dopo centrifugazione, l’RNA è stato estratto con cloroformio e precipitato con alcol isopropilico. I campioni di RNA sono stati quindi risospesi in 100 µl di H 2 O trattata con DEPC. Quindi 10 µg di RNA totale sono stati trattati con DNasi libera da RNasi ( Qiagen ) a 37°C per 1 ora e ulteriormente purificati mediante estrazione 3:1 fenolo/cloroformio seguita da precipitazione con etanolo.
- Dall’RNA purificato, 1 µg è stato utilizzato nel kit SYBR GreenER Two-Step qRT-PCR ( Invitrogen) per la sintesi del cDNA del primo filamento e la PCR quantitativa in tempo reale (qRT-PCR). L’effetto dell’esposizione perinatale a Pb2 + sui geni associati allo sviluppo neuronale precoce e allo spostamento del GABA è stato valutato esprimendo le isoforme 80, 86, 65 e 67 di Ca-β3, GABAAR-β3, NKCC1, KCC2 e GAD.
CircularRNA circ_0071269 knockdown protegge dai danni alla cardiomiopatia diabetica da parte dell’asse A microRNA-145 / gasdermina
- Gli RNA rotondi (circRNA) sono coinvolti nello sviluppo e nella progressione della cardiomiopatia diabetica (DCM). Tuttavia, la funzione specifica e il meccanismo alla base di circ_0071269 in DCM rimangono poco chiari. Nel nostro studio, l’espressione di mRNA e miRNA è stata rilevata mediante PCR quantitativa in tempo reale (qRT-PCR). Per studiare le caratteristiche di lattato actinomicina D. eR utilizzatocirc_0071269, , rispettivamente.
- La mortalità cellulare è stata determinata mediante citometria a flusso e le Western blot sono state studiate sui livelli di espressione proteica. Inoltre, sono stati eseguiti saggi reporter della luciferasi e saggi di pull-down dell’RNA per confermare la relazione di legame tra miR-145 e circ_0071269 o gasdermin A (GSDMA). Sono state eseguite ecocardiografia, colorazione con ematossilina ed eosina (HE) e colorazione immunoistochimica (IHC) per valutare il danno miocardico in vivo .
- Abbiamo scoperto che circ_0071269 era significativamente sovraespresso nelle cellule H9c2 dopo un trattamento con glucosio elevato. Il knockdown circ_0071269 ha promosso la vitalità cellulare e ha inibito la risposta infiammatoria, la citotossicità e la pirotosi delle cellule H9c2 in vitro . Inoltre, spugna circ_0071269 miR-145 per aumentare il GSDMA. L’inibitore del miR-145 ha antagonizzato l’effetto del knockdown circ_0071269 sulla funzione cellulare delle cellule H9c2, mentre l’effetto del miR-145 è stato abolito dalla sovraespressione del GSDMA . Nel frattempo, il knockdown circ_0071269 ha ridotto la disfunzione cardiaca nei topi DM. Quindi, circ_0071269 può promuovere lo sviluppo del DCM attraverso l’asse miR-145 / GSDMA e quindi fornire un nuovo marker per il trattamento del DCM.
Circ_0001206 regola l’asse miR-665 / CRKL per alleviare l’ipossia / il danno cardiomiocitario indotto dalla riossigenazione nell’infarto del miocardio
- L’infarto miocardico (IM) è un tipo di malattia cardiovascolare causata dalla necrosi del muscolo cardiaco. L’evidenza accumulata suggerisce che l’RNA circolare (circRNA) svolge un ruolo chiave nel danno da infarto miocardico indotto da ipossia cardiaca / riossigenazione (H / R).
- È stato stabilito un modello di ipossia / riossigenazione delle cellule H9C2 ed è stata rilevata l’espressione di circa 0001206 mediante reazione a catena della polimerasi quantitativa in tempo reale. I test della ribonucleasi R ( RNasi R) e dell’actinomicina D (Atto D) hanno confermato la stabilità.
- Il kit per il conteggio delle cellule -8 (CCK-8), i western blot, TUNEL e la citometria a flusso hanno valutato la vitalità cellulare e l’apoptosi cellulare. La downregulation dell’RNA, l’ immunoprecipitazione delle proteine leganti l’RNA (RIP) e i saggi reporter della luciferasi hanno studiato i meccanismi alla base dell’MI .
- Tutti i dati sperimentali sono stati presentati con la media ± deviazione standard (DS) e P <0,05 indicava la significatività statistica. Circ_0001206 era basso espresso nelle cellule H9C2 trattate con H / R. Circ_0001206 è il risultato della ciclizzazione di CRK come il proto-oncogene, proteina adattiva (CRKL). La sovraespressione di Circ_0001206 promuoveva la vitalità cellulare e inibiva l’apoptosi dei cardiomiociti.
Sterile DNase/RNase-free Low Retention Filtered Pipette Tip |
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AI1000R7 | Abclonal | 1000μL | Ask for price |
Sterile DNase/RNase-free Low Retention Filtered Pipette Tip |
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AI100R2 | Abclonal | 100μL | Ask for price |
Sterile DNase/RNase-free Low Retention Filtered Pipette Tip |
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AI10R7 | Abclonal | 10μL | Ask for price |
Sterile DNase/RNase-free Low Retention Filtered Pipette Tip |
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AI200R4 | Abclonal | 200μL | Ask for price |
Sterile DNase/RNase-free Low Retention Filtered Pipette Tip |
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AI20R2 | Abclonal | 20μL | Ask for price |
Sterile DNase/RNase-free Long Low Retention Filtered Pipette Tip |
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AI10R8 | Abclonal | 10μL | Ask for price |
DNase-I/ Rat DNase- I ELISA Kit |
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ELA-E1127r | Lifescience Market | 96 Tests | 886 EUR |
PLT,96WL,HALF AREA,UV,NT,RNASE/DNASE FREE,NS,BK,25/50 |
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3679 | CORNING | 25/pk | 671 EUR |
RNase A |
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RB0473 | Bio Basic | 500mg | 183.11 EUR |
RNase A |
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RN103-001 | GenDepot | 300mg | 2615 EUR |
RNase A |
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abx098139-1ml | Abbexa | 1 ml | 217 EUR |
PI / RNAse |
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abx290029-200tests | Abbexa | 200 tests | 272 EUR |
RNase A |
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M1227-25 | Biovision | 245 EUR | |
RNase R |
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M1228-500 | Biovision | 365 EUR | |
Sheep RNase ELISA Kit |
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ESR0364 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Anserini RNASE ELISA Kit |
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EAR0364 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Rat RNase ELISA Kit |
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ERR0364 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Rabbit RNase ELISA Kit |
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ERTR0364 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Monkey RNase ELISA Kit |
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EMKR0364 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Mouse RNase ELISA Kit |
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EMR0364 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Porcine RNase ELISA Kit |
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EPR0364 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Goat RNase ELISA Kit |
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EGTR0364 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Human RNase ELISA Kit |
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EHR0364 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Bovine RNase ELISA Kit |
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EBR0364 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Chicken RNase ELISA Kit |
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ECKR0364 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Canine RNase ELISA Kit |
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ECR0364 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
RNASE ELISA KIT|Human |
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EF007146 | Lifescience Market | 96 Tests | 689 EUR |
DNase I |
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DN102-001 | GenDepot | 100mg | 1441 EUR |
DNase I |
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M1230-2000 | Biovision | 289 EUR | |
Human Ribonuclease(RNASE)ELISA Kit |
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GA-E0783HM-48T | GenAsia Biotech | 48T | 289 EUR |
Human Ribonuclease(RNASE)ELISA Kit |
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GA-E0783HM-96T | GenAsia Biotech | 96T | 466 EUR |
Guinea Pig RNase ELISA Kit |
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EGR0364 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Human Ribonuclease,RNASE ELISA Kit |
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201-12-0767 | SunredBio | 96 tests | 440 EUR |
Chicken Ribonuclease (RNASE) ELISA Kit |
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abx354731-96tests | Abbexa | 96 tests | 825 EUR |
Monkey Ribonuclease (RNASE) ELISA Kit |
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abx355046-96tests | Abbexa | 96 tests | 825 EUR |
Pig Ribonuclease (RNASE) ELISA Kit |
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abx355190-96tests | Abbexa | 96 tests | 825 EUR |
Rabbit Ribonuclease (RNASE) ELISA Kit |
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abx355297-96tests | Abbexa | 96 tests | 825 EUR |
Human Ribonuclease (RNASE) ELISA Kit |
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abx253109-96tests | Abbexa | 96 tests | 707 EUR |
Human Ribonuclease(RNASE)ELISA Kit |
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QY-E03180 | Qayee Biotechnology | 96T | 361 EUR |
Human RNASE(Ribonuclease) ELISA Kit |
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EH3719 | FN Test | 96T | 524.1 EUR |
Human Ribonuclease,RNASE ELISA Kit |
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CN-04532H1 | ChemNorm | 96T | 447 EUR |
Human Ribonuclease,RNASE ELISA Kit |
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CN-04532H2 | ChemNorm | 48T | 296 EUR |
Rnase A, 1g |
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R9001-1g | ACTGene | 822 EUR | |
Rnase A, 250mg |
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R9001-250mg | ACTGene | 281 EUR | |
RiboSafe RNase Inhibitor |
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BIO-65027 | Bioline | 2500 Units | Ask for price |
RiboSafe RNase Inhibitor |
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BIO-65028 | Bioline | 10,000 Units | Ask for price |
RNAse H2A Antibody |
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24819-100ul | SAB | 100ul | 390 EUR |
Rnase (90–105) |
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5-01885 | CHI Scientific | 4 x 1mg | Ask for price |
RNase-Free water |
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abx098145-25ml | Abbexa | 25 ml | 175 EUR |
Rnase A, Pancreatic |
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abx082443-25mg | Abbexa | 25 mg | 189 EUR |
RNase A (MBG) |
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409-050 | GeneOn | 50 mg | 73 EUR |
RNase A (MBG) |
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409-250 | GeneOn | 250 mg | 193 EUR |
RNase 1 Antibody |
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20-abx141499 | Abbexa |
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RNase 13 Antibody |
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20-abx141582 | Abbexa |
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RNase T2 Antibody |
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abx237324-100ug | Abbexa | 100 ug | 509 EUR |
RNase A Solution |
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G118 | ABM | 1.0 ml; 10 mg/ml | 102 EUR |
anti-RNase H1 |
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YF-PA26995 | Abfrontier | 50 ul | 334 EUR |
Thermostable RNAse H |
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M1224-100 | Biovision | 321 EUR | |
RNase III, E.coli |
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M1226-100 | Biovision | 224 EUR | |
anti-RNase L |
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YF-PA24584 | Abfrontier | 50 ul | 334 EUR |
Murine Rnase inhibitor |
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R301-01 | Vazyme | 2000 U | 116 EUR |
Murine Rnase inhibitor |
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R301-02 | Vazyme | 10000 U | 166 EUR |
Murine Rnase inhibitor |
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R301-03 | Vazyme | 20000 U | 219 EUR |
RNAse H2A Antibody |
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4979-002mg | ProSci | 0.02 mg | 171.82 EUR |
RNAse H2A Antibody |
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4979-01mg | ProSci | 0.1 mg | 436.42 EUR |
RNase L Peptide |
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46-735P | ProSci | 0.1 mg | 338 EUR |
RNAse H2A Peptide |
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4979P | ProSci | 0.05 mg | 164.75 EUR |
Sheep Dnase I ELISA Kit |
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ESD0221 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Anserini Dnase-I ELISA Kit |
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EAD0253 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Rat Dnase I ELISA Kit |
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ERD0221 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Rat Dnase-I ELISA Kit |
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ERD0253 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Rabbit Dnase I ELISA Kit |
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ERTD0221 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Rabbit Dnase-I ELISA Kit |
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ERTD0253 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Mouse Dnase I ELISA Kit |
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EMD0221 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Mouse Dnase-I ELISA Kit |
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EMD0253 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Monkey Dnase I ELISA Kit |
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EMKD0221 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Porcine Dnase I ELISA Kit |
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EPD0221 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Porcine Dnase-I ELISA Kit |
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EPD0253 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Human Dnase I ELISA Kit |
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EHD0221 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Human Dnase-I ELISA Kit |
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EHD0253 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Canine Dnase I ELISA Kit |
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ECD0221 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Canine Dnase-I ELISA Kit |
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ECD0253 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Chicken Dnase I ELISA Kit |
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ECKD0221 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
Goat Dnase I ELISA Kit |
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EGTD0221 | Abclonal | 96Tests | 521 EUR |
È stato confermato che Circ_0001206 regola l’espressione di CRKL agendo come un microRNA-665 (miR-665) di RNA endogeno (ceRNA) in competizione. CRKL ha svolto un ruolo protettivo nel MI.