Round RNA circ_0000644 promuove la progressione del cancro papillare della tiroide attraverso la spugna miR-1205 e la regolazione dell’espressione di E2F3

June 19, 2022 Eric Bishop Blog, Genetics and biology of Anastrepha fraterculus: research supporting the use of the sterile insect technique (SIT) to control this pest in Argentina., More than two decades of research on insect neuropeptide GPCRs: an overview. 0

    1. La deregolazione dell’RNA circolare (circRNA) facilita la neoplasia del carcinoma papillare della tiroide (PTC). Lo scopo di questo studio era di determinare la funzione e il meccanismo di circ_0000644 nella regolazione dello sviluppo del PTC. Espressioni di Circ_0000644, microRNA-1205 (miR-1205) ed E2F del fattore di trascrizione 3 (E2F3)   sono state rilevate   mediante reazione a catena della polimerasi quantitativa in tempo reale (qRT-PCR). Sono stati utilizzati saggi con actinomicina D (ActD) e ribonucleasi R (  RNasi   R)  per verificare le caratteristiche circolari di circ_0000644. Dopo la soppressione di circ_0000644  , la crescita, la migrazione, l’invasione e l’apoptosi delle cellule PTC sono state valutate utilizzando   rispettivamente il kit di conteggio delle cellule -8  (CCK-8), il saggio Transwell e l’analisi citometrica a flusso.
    2. La relazione regolatoria tra circ_0000644, E2F3 e miR-1205 è stata confermata nel saggio di immunoprecipitazione dell’RNA (RIP) e nel saggio reporter della doppia luciferasi. Inoltre, gli effetti regolatori di circ_0000644 sul livello della proteina E2F3 sono stati analizzati mediante Western blotting. In PTC, circ_0000644 ha mostrato un’elevata espressione ed era localizzato principalmente nel citoplasma e aveva una struttura stabile. L’impatto circ_0000644 ha inibito la crescita, la migrazione e l’invasione del PTC e ha facilitato l’apoptosi. Circ_0000644 potrebbe interagire direttamente con miR-1205 per inibire l’espressione di miR-1205 e fungere da spugna miR-1205 per modulare l’espressione di E2F3 nelle cellule PTC. Circ_0000644 aumenta l’espressione di E2F3 spugnando miR-1205 per promuovere la progressione del PTC.

Carbonilazione proteica: evitamento delle trappole nel dosaggio della 2,4-dinitrofenilidrazina.

Il contenuto di carbonile proteico è ampiamente utilizzato sia come indicatore dello stress ossidativo che come misura del danno ossidativo. I metodi ampiamente utilizzati di test di carbonilazione proteica utilizzano la reazione di gruppi carbonilici con 2,4-dinitrofenilidrazina (DNPH) per produrre 2,4-dinitrofenilidrazone legato alle proteine. Gli idrazoni possono essere quantificati spettrofotometricamente o, per una maggiore sensibilità,   rilevati   immunochimicamente utilizzando anticorpi anti-dinitrofenile. È importante prestare attenzione alla metodologia per evitare l’elevazione degli artefatti delle misurazioni del carbonile proteico. Abbiamo testato gli estratti di Escherichia coliidentificare ed eliminare tali effetti. La contaminazione con acido nucleico ha causato un aumento grave e artefatto del contenuto di carbonili proteici determinato mediante tecniche spettrofotometriche.
Sia gli oligonucleotidi di DNA sintetizzati in vitro che il DNA cromosomico purificato  hanno reagito fortemente con 2,4-DNPH. Il trattamento di estratti cellulari con   DNasi  +  RNasi   o streptomicina solfato per precipitare gli acidi nucleici  ha ridotto drasticamente il carbonile visibile, mentre l’esposizione alla proteinasi K no.
Il kit commerciale   per il rilevamento   immunochimico     della carbonilazione proteica (OxyBlot di Chemicon / Millipore) raccomanda un’elevata concentrazione di tiolo nel tampone di omogeneizzazione. Abbiamo scoperto che questa raccomandazione porta a un raddoppio artificiale della proteina carbonile, probabilmente a causa di una reazione di Fenton stimolata dal tiolo. Evitare le condizioni ossidative, rimuovere gli acidi nucleici e etichettare rapidamente i campioni può prevenire effetti di artefatto sulle misurazioni del carbonile proteico.

L’esposizione perinatale a Pb2 + modifica l’espressione dei geni associati allo spostamento neuroevolutivo del GABA nei ratti postnatali

Il piombo (Pb2 +) è un agente neurotossico ambientale che interferisce con lo sviluppo neurologico, la comunicazione e l’organizzazione competendo con la segnalazione di Ca2 +. Non è chiaro come l’esposizione perinatale a Pb2 + influenzi la regolazione genica correlata a Ca2 +. Tuttavia, Ca2 + attiva la subunità β-3 del canale del calcio voltaggio-sensibile di tipo L (Ca-β3), che  autoregola l’eccitabilità neuronale e svolge un ruolo nello spostamento del GABA dalla neurotrasmissione eccitatoria a quella inibitoria  .
Un totale di otto femmine (n = 4 controlli e n = 4 perinatali) e quattro maschi (n = 2 controlli e n = 2 perinatali) sono stati utilizzati come riproduttori per fungere da madri e padri.
  1. Le cucciolate della madre di ogni cucciolata variavano da N = 6-10 cuccioli per cucciolata (M = 8, SD = 2), indipendentemente dal trattamento Pb2 +, maschio rispetto alla femmina. Poiché c’erano più maschi che femmine in ogni cucciolata, al fine di valutare e controllare equamente gli effetti di Pb2 + – e la cucciolata in tutti i momenti di sviluppo testati, le femmine sono state escluse a causa dell’insufficiente disponibilità di dimensioni del campione dalla cucciolata ottenuta. .
  2. Dalle cucciolate incluse, in questo studio sono stati utilizzati 24 ratti maschi con cappuccio Long Evans sperimentalmente ingenui (controllo N = 12; Pb2 + N = 12). I cervelli sono stati estratti dalla corteccia prefrontale di ratto (PFC) e dall’ippocampo (HP) il giorno postpartum (PND) 2, 7, 14 e 22, omogeneizzati in 1 ml di reagente TRIzol per 100 mg di tessuto utilizzando un omogeneizzatore di vetro Teflon.
  3. Dopo centrifugazione, l’RNA è stato estratto con cloroformio e precipitato con alcol isopropilico. I campioni di RNA sono stati quindi risospesi in 100 µl di H 2 O trattata con DEPC. Quindi 10 µg di RNA totale sono stati trattati con  DNasi libera da RNasi  (   Qiagen   ) a 37°C per 1 ora e ulteriormente purificati mediante estrazione 3:1 fenolo/cloroformio seguita da  precipitazione con etanolo.
  4. Dall’RNA purificato, 1 µg è stato utilizzato nel kit SYBR GreenER Two-Step qRT-PCR   (   Invitrogen) per la sintesi del cDNA del primo filamento e la PCR quantitativa in tempo reale (qRT-PCR). L’effetto dell’esposizione perinatale a Pb2 + sui geni associati allo sviluppo neuronale precoce e allo spostamento del GABA è stato valutato esprimendo le isoforme 80, 86, 65 e 67 di Ca-β3, GABAAR-β3, NKCC1, KCC2 e GAD.

CircularRNA circ_0071269 knockdown protegge dai danni alla cardiomiopatia diabetica da parte dell’asse A microRNA-145 / gasdermina

  • Gli RNA rotondi (circRNA) sono coinvolti nello sviluppo e nella progressione della cardiomiopatia diabetica (DCM). Tuttavia, la funzione specifica e il meccanismo alla base di circ_0071269 in DCM rimangono poco chiari. Nel nostro studio, l’espressione di mRNA e miRNA   è stata rilevata   mediante PCR quantitativa in tempo reale (qRT-PCR).  Per studiare le caratteristiche di   lattato   actinomicina D. eR  utilizzatocirc_0071269, , rispettivamente. 
  • La mortalità cellulare è stata determinata mediante citometria a flusso e le Western blot sono state studiate sui livelli di espressione proteica. Inoltre, sono stati eseguiti saggi reporter della luciferasi e saggi di pull-down dell’RNA per confermare la relazione di legame tra miR-145 e circ_0071269 o gasdermin A (GSDMA).  Sono state eseguite ecocardiografia, colorazione con ematossilina ed eosina (HE) e colorazione immunoistochimica (IHC) per valutare il danno miocardico in vivo .
  • Abbiamo scoperto che circ_0071269 era significativamente sovraespresso nelle cellule H9c2 dopo un trattamento con glucosio elevato. Il knockdown circ_0071269 ha promosso la vitalità cellulare e ha inibito la risposta infiammatoria, la citotossicità e la pirotosi delle cellule H9c2   in vitro  . Inoltre, spugna circ_0071269 miR-145 per aumentare il GSDMA. L’inibitore del miR-145  ha antagonizzato l’effetto del knockdown circ_0071269 sulla funzione cellulare delle cellule H9c2, mentre l’effetto del miR-145 è stato abolito dalla sovraespressione del GSDMA  . Nel frattempo, il knockdown circ_0071269 ha ridotto la disfunzione cardiaca nei topi DM. Quindi, circ_0071269 può promuovere lo sviluppo del DCM attraverso l’asse miR-145 / GSDMA e quindi fornire un nuovo marker per il trattamento del DCM.

Circ_0001206 regola l’asse miR-665 / CRKL per alleviare l’ipossia / il danno cardiomiocitario indotto dalla riossigenazione nell’infarto del miocardio

  1. L’infarto miocardico (IM) è un tipo di malattia cardiovascolare causata dalla necrosi del muscolo cardiaco. L’evidenza accumulata suggerisce che l’RNA circolare (circRNA) svolge un ruolo chiave nel danno da infarto miocardico indotto da ipossia cardiaca / riossigenazione (H / R).
  2. È stato stabilito un modello di ipossia / riossigenazione delle cellule H9C2 ed è stata rilevata l’espressione di circa 0001206   mediante   reazione a catena della polimerasi quantitativa in tempo reale. I test della ribonucleasi R (  RNasi   R) e dell’actinomicina D (Atto D) hanno confermato la stabilità.
  3. Il kit per il conteggio delle cellule -8  (CCK-8), i western blot, TUNEL e la citometria a flusso hanno valutato la vitalità cellulare e l’apoptosi cellulare. La downregulation dell’RNA, l’  immunoprecipitazione delle proteine ​​​​leganti l’RNA (RIP) e i saggi reporter della luciferasi hanno studiato i meccanismi alla base dell’MI .
  4. Tutti i dati sperimentali sono stati presentati con la media ± deviazione standard (DS) e P <0,05 indicava la significatività statistica. Circ_0001206 era basso espresso nelle cellule H9C2 trattate con H / R. Circ_0001206 è il risultato della ciclizzazione di CRK come il proto-oncogene, proteina adattiva (CRKL). La sovraespressione di Circ_0001206 promuoveva la vitalità cellulare e inibiva l’apoptosi dei cardiomiociti.

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Rnase A, 1g
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RiboSafe RNase Inhibitor
BIO-65027 Bioline 2500 Units Ask for price

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RNAse H2A Antibody
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Rnase (90–105)
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RNase 1 Antibody
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RNase T2 Antibody
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G118 ABM 1.0 ml; 10 mg/ml 102 EUR

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Sheep Dnase I ELISA Kit
ESD0221 Abclonal 96Tests 521 EUR

Anserini Dnase-I ELISA Kit
EAD0253 Abclonal 96Tests 521 EUR

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ERD0253 Abclonal 96Tests 521 EUR

Rabbit Dnase I ELISA Kit
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Mouse Dnase I ELISA Kit
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Monkey Dnase I ELISA Kit
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Porcine Dnase I ELISA Kit
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Canine Dnase I ELISA Kit
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Chicken Dnase I ELISA Kit
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Goat Dnase I ELISA Kit
EGTD0221 Abclonal 96Tests 521 EUR

È stato confermato che Circ_0001206 regola l’espressione di CRKL agendo come un microRNA-665 (miR-665) di RNA endogeno (ceRNA) in competizione. CRKL ha svolto un ruolo protettivo nel MI.