1. Le cucciolate della madre di ogni cucciolata variavano da N = 6-10 cuccioli per cucciolata (M = 8, SD = 2), indipendentemente dal trattamento Pb2 +, maschio rispetto alla femmina. Poiché c’erano più maschi che femmine in ogni cucciolata, al fine di valutare e controllare equamente gli effetti di Pb2 + – e la cucciolata in tutti i momenti di sviluppo testati, le femmine sono state escluse a causa dell’insufficiente disponibilità di dimensioni del campione dalla cucciolata ottenuta. .
2. Dalle cucciolate incluse, in questo studio sono stati utilizzati 24 ratti maschi con cappuccio Long Evans sperimentalmente ingenui (controllo N = 12; Pb2 + N = 12). I cervelli sono stati estratti dalla corteccia prefrontale di ratto (PFC) e dall’ippocampo (HP) il giorno postpartum (PND) 2, 7, 14 e 22, omogeneizzati in 1 ml di reagente TRIzol per 100 mg di tessuto utilizzando un omogeneizzatore di vetro Teflon.
3. Dopo centrifugazione, l’RNA è stato estratto con cloroformio e precipitato con alcol isopropilico. I campioni di RNA sono stati quindi risospesi in 100 µl di H 2 O trattata con DEPC. Quindi 10 µg di RNA totale sono stati trattati con  DNasi libera da RNasi  (   Qiagen   ) a 37°C per 1 ora e ulteriormente purificati mediante estrazione 3:1 fenolo/cloroformio seguita da  precipitazione con etanolo.
4. Dall’RNA purificato, 1 µg è stato utilizzato nel kit SYBR GreenER Two-Step qRT-PCR   (   Invitrogen) per la sintesi del cDNA del primo filamento e la PCR quantitativa in tempo reale (qRT-PCR). L’effetto dell’esposizione perinatale a Pb2 + sui geni associati allo sviluppo neuronale precoce e allo spostamento del GABA è stato valutato esprimendo le isoforme 80, 86, 65 e 67 di Ca-β3, GABAAR-β3, NKCC1, KCC2 e GAD.

CircularRNA circ_0071269 knockdown protegge dai danni alla cardiomiopatia diabetica da parte dell’asse A microRNA-145 / gasdermina

• Gli RNA rotondi (circRNA) sono coinvolti nello sviluppo e nella progressione della cardiomiopatia diabetica (DCM). Tuttavia, la funzione specifica e il meccanismo alla base di circ_0071269 in DCM rimangono poco chiari. Nel nostro studio, l’espressione di mRNA e miRNA   è stata rilevata   mediante PCR quantitativa in tempo reale (qRT-PCR).  Per studiare le caratteristiche di   lattato   actinomicina D. eR  utilizzatocirc_0071269, , rispettivamente. 
• La mortalità cellulare è stata determinata mediante citometria a flusso e le Western blot sono state studiate sui livelli di espressione proteica. Inoltre, sono stati eseguiti saggi reporter della luciferasi e saggi di pull-down dell’RNA per confermare la relazione di legame tra miR-145 e circ_0071269 o gasdermin A (GSDMA).  Sono state eseguite ecocardiografia, colorazione con ematossilina ed eosina (HE) e colorazione immunoistochimica (IHC) per valutare il danno miocardico in vivo .
• Abbiamo scoperto che circ_0071269 era significativamente sovraespresso nelle cellule H9c2 dopo un trattamento con glucosio elevato. Il knockdown circ_0071269 ha promosso la vitalità cellulare e ha inibito la risposta infiammatoria, la citotossicità e la pirotosi delle cellule H9c2   in vitro  . Inoltre, spugna circ_0071269 miR-145 per aumentare il GSDMA. L’inibitore del miR-145  ha antagonizzato l’effetto del knockdown circ_0071269 sulla funzione cellulare delle cellule H9c2, mentre l’effetto del miR-145 è stato abolito dalla sovraespressione del GSDMA  . Nel frattempo, il knockdown circ_0071269 ha ridotto la disfunzione cardiaca nei topi DM. Quindi, circ_0071269 può promuovere lo sviluppo del DCM attraverso l’asse miR-145 / GSDMA e quindi fornire un nuovo marker per il trattamento del DCM.

Circ_0001206 regola l’asse miR-665 / CRKL per alleviare l’ipossia / il danno cardiomiocitario indotto dalla riossigenazione nell’infarto del miocardio

1. L’infarto miocardico (IM) è un tipo di malattia cardiovascolare causata dalla necrosi del muscolo cardiaco. L’evidenza accumulata suggerisce che l’RNA circolare (circRNA) svolge un ruolo chiave nel danno da infarto miocardico indotto da ipossia cardiaca / riossigenazione (H / R).
2. È stato stabilito un modello di ipossia / riossigenazione delle cellule H9C2 ed è stata rilevata l’espressione di circa 0001206   mediante   reazione a catena della polimerasi quantitativa in tempo reale. I test della ribonucleasi R (  RNasi   R) e dell’actinomicina D (Atto D) hanno confermato la stabilità.
3. Il kit per il conteggio delle cellule -8  (CCK-8), i western blot, TUNEL e la citometria a flusso hanno valutato la vitalità cellulare e l’apoptosi cellulare. La downregulation dell’RNA, l’  immunoprecipitazione delle proteine ​​​​leganti l’RNA (RIP) e i saggi reporter della luciferasi hanno studiato i meccanismi alla base dell’MI .
4. Tutti i dati sperimentali sono stati presentati con la media ± deviazione standard (DS) e P <0,05 indicava la significatività statistica. Circ_0001206 era basso espresso nelle cellule H9C2 trattate con H / R. Circ_0001206 è il risultato della ciclizzazione di CRK come il proto-oncogene, proteina adattiva (CRKL). La sovraespressione di Circ_0001206 promuoveva la vitalità cellulare e inibiva l’apoptosi dei cardiomiociti.